1、鼻拭子采集标准操作流程的确定实验员蹲于猪的左侧,左手抓紧实验猪的上下鄂,使猪嘴紧闭,右臂肘部与右腿将实验猪颈部夹住,对其进行固定。当实验猪情绪稳定后,右手持棉签,将棉签与猪鼻中隔成45°角轻轻插入,遇到鼻中隔后,稍作拐弯,绕过骨状辨膜,与鼻中隔平行方向插入约2cm。轻轻转动棉签,刺激实验猪的喷嚏反射,当打2~3个喷嚏后,轻轻拔出棉签,放入1mL样品贮存液中,折断多余部分的棉棒,密闭收集管,标号后于4°C保存。
如果鼻拭子采集失败如鼻拭子掉落、鼻拭子上有明显血迹等,则需要重新采集。重新采集则需从另一个鼻孔进行操作,采集方法见图。
2、鼻拭子处理标准操作流程的确定将收集的鼻拭子浸液在4°C过夜。第二天,在涡旋振荡器上震荡5s后,用1mL移液器尽量吸出鼻拭子浸液,10000r/min,离心5min,取上清,-20°C,保存备用。
3、样品稳定性测定采用BCA蛋白浓度检测试剂盒检测各鼻拭子样本中的总蛋白浓度,通过各样本之间变异系数来确定该方法的稳定性。